在《生化危机5》的PC版本中，玩家们可以体验到丰富的操作方式。无论是手柄操作、全键盘控制，还是键鼠结合，都能满足不同玩家的需求。初版PC游戏上市时，许多玩家反映操作导致头晕，但经过个人调整，将鼠标灵敏度设置为2，并结合小范围鼠标移动和键盘“C”键的急转身操作，即可轻松应对各种难度。
在存储模式方面，游戏引入了更受欢迎的checkpoint系统，并借鉴了《鬼泣》系列，将关卡设置为可选模式，允许玩家无限刷钱和子弹。如果对某关怪物不满，玩家可以选择回到之前的关卡刷RPG来解决问题。另外游戏还从《鬼泣》中引入了挑衅系统，但该系统在游戏中并无实际作用，既不能吸引敌人火力，也不能改变过关评价，更不具备《鬼泣》系列攻击的华丽度。
佣兵模式在《生化危机5》中表现尤为出色，其可玩性和挑战性都得到了提升。游戏沿袭了《生化危机4》的佣兵模式，并将场景从4个扩展到8个，人物从5个增加到10个。地图的复杂性增加，难度相应提高，部分场景还提供了RPG武器，使得打法更加多样化。另外PC版本还特别加入了无双模式，将敌人数量从150增加到400，更接近生存模式的体验。
合作模式是游戏的另一大亮点。与《生化危机0》中一人控制双角色的方式不同，玩家可以与朋友联机通关或进行佣兵合作。另外玩家还可以选择与电脑控制的角色一起通关。刚开始时玩家可能会抱怨西瓦才是最大的敌人，因为使用子弹就像倒水一样，经常弹药不足。但通关后选择克里斯作为电脑控制的角色会更加有趣，克里斯就像观众一样站在玩家身边，攻击频率极低，更多时候玩家需要独自完成两个人的工作量。有时在杀威哥第一阶段，玩家好不容易将威哥击倒，呼叫克里斯来插管，却发现克里斯跑去捡钱了，这让人意识到电脑控制的不可信。另外除了新手、普通、老手、专家四个难度外，玩家还需要考虑选择西瓦还是克里斯，这意味着共有8种难度。如果与其他玩家合作，难度更是无法预测。正如俗话所说：“不怕神一样的对手，就怕猪一样的队友。”
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